為確保ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier CSH色譜柱始終保持理想性能,請遵循以下原則:
a. 樣品前處理
1. 樣品中的雜質(zhì)往往會污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Oasis?固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak?小柱凈化樣品。如需了解更多信息,請?jiān)L問
www.waters.com/sampleprep。
2. 為獲得理想峰形和靈敏度,優(yōu)先選用運(yùn)行分析時擬用的流動相或比它更弱的流動相來制備樣品。
3. 如果樣品不溶于流動相,請確保樣品、溶劑和流動相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖鹽析出。
4. 用0.2μm濾膜過濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑(如乙腈、甲醇等),請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。
或者,可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>
b. pH范圍
有關(guān)pH范圍和推薦操作溫度的信息,請參見表2。
表3列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。
表2. ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier CSH色譜柱的推薦pH和溫度限值
c. 溶劑
為了保持理想的色譜柱性能,請使用高品質(zhì)色譜級溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2 -m濾膜過濾。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會堵塞色譜柱入口篩板,這會導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息,請參閱第V節(jié)。
d. 壓力
ACQUITY CSH色譜柱能夠承受高達(dá)18,000psi(1241 bar或124 MPa)的操作壓力。
注:在壓力、pH和/或溫度的極值下運(yùn)行會縮短色譜柱使用壽命。
e. 溫度
為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,ACQUITY CSH色譜柱的推薦操作溫度范圍為不超過80℃。在高pH條件下操作時,建議降低操作溫度以延長色譜柱使用壽命。在較高溫度下(如70℃以上)運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。有關(guān)推薦操作溫度和pH范圍的更多信息見下方表2。
注:在溫度、壓力和/或pH的極值下運(yùn)行會縮短色譜柱使用壽命。
表3. 使用ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier CSH色譜柱時的推薦緩沖鹽