中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB 5009.223-2014
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品中氨基甲酸乙酯的測(cè)定
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了啤酒﹑葡萄酒﹑黃酒、白酒等酒類(lèi)以及醬油中氨基甲酸乙酯含量的氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于啤酒﹑葡萄酒﹑黃酒﹑白酒等酒類(lèi)以及醬油中氨基甲酸乙酯含量的測(cè)定。
2原理
試樣加D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)過(guò)堿性硅藻土固相萃取柱凈化、洗脫，洗脫液濃縮后﹐用氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定﹐內(nèi)標(biāo)法定量。
3試劑和材料
注：除非另有說(shuō)明，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的三級(jí)水。
3.1試劑
3.1.1無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）。
3.1.2氯化鈉（NaCl）。
3.1.3正己烷（C6H14）：色譜純。
3.1.4 乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。
3.1.5乙醚（C4H10O）：色譜純。
3.1.6甲醇（CH4O）：色譜純。
3.1.7堿性硅藻土固相萃取柱：填料4 000 mg，柱容量12 mL。
3.2試劑配制
3.2.1無(wú)水硫酸鈉：450℃烘烤4 h，冷卻后貯存于干燥器中備用。
3.2.2 5%乙酸乙酯-乙醚溶液：取5mL乙酸乙酯，用乙醚稀釋到100 mL，混勻待用。
3.3標(biāo)準(zhǔn)品
3.3.1氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7O2N，CAS：51-79-6）：純度大于99.0%。
3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品（C3H2D5NO2，CAS：73962-07-9）：純度大于98.0%。
3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.01g（精確到0.0001g）D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解，定容至10 mL，4℃以下保存。
3.4.2 D5-氨基甲酸乙酯使用液（2.00μg/mL）：準(zhǔn)確吸取D5-氨基甲酸乙酯儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）0.10 mL，用甲醇定容至50 mL，4℃以下保存。
3.4.3 氨基甲酸乙酯儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.05 g（精確到0.000 1 g）氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解﹑定容至50 mL，4℃以下保存，保存期3個(gè)月。
3.4.4 氨基甲酸乙酯中間液（10.0μg/mL）：準(zhǔn)確吸取氨基甲酸乙酯儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）1.00 mL，用甲醇定容至100 mL，4℃以下保存，保存期1個(gè)月。
3.4.5 氨基甲酸乙酯中間液（0.50 g/mL）：準(zhǔn)確吸取氨基甲酸乙酯中間液（10.0 ug/mL）5.00 ml，用甲醇定容至100 mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。
3.4.6標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取氨基甲酸乙酯中間液（0.50μg/mL）20.0μL，50.0μL，100.0μL、200.0μL，400.0μL，和氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL）40.0μL，100.0μL于7個(gè)1mL容量瓶中，各加2.00μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液100μL，用甲醇定容至刻度﹐得到10.0 ng/mL、25.0 ng/mL，50.0 ng/mL，100 ng/mL，200 ng/mL，400 ng/ml，1000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
4儀器和設(shè)備
4.1 氣相色譜-質(zhì)譜儀，帶電子轟擊源（EI）源。
4.2渦旋混勻器。
4.3 氮吹儀。
4.4固相萃取裝置，配真空泵。
4.5超聲波清洗機(jī)。
4.6馬弗爐。
4.7天平：感量為0.1mg 和1mg。
5分析步驟
5.1試樣制備
樣品搖勻，稱(chēng)取2g（精確至0.001 g）樣品（啤酒超聲5 min脫氣后稱(chēng)量），加100.0μL 2.00 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液﹑氯化鈉0.3 g（若為醬油不加氯化鈉），超聲溶解、混勻后，加樣到堿性硅藻土固相萃取柱上﹐在真空條件下﹐將樣品溶液緩慢滲入萃取柱中，并靜置10 min。經(jīng)10 mL正己烷淋洗后，用10 mL 5%乙酸乙酯-乙醚溶液以約1mL/min流速進(jìn)行洗脫﹐洗脫液經(jīng)裝有2g無(wú)水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水后，收集于10 mL刻度試管中，室溫下用氮?dú)饩従彺抵良s0.5 mL，用甲醇定容至1.00 mL制成測(cè)定液﹐供GC/MS分析。
5.2儀器參考條件
氣相色譜-質(zhì)譜儀分析參考條件：
——毛細(xì)管色譜柱：DB-INNOWAX ，30 m×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25μm（膜厚）或相當(dāng)色譜柱；
——進(jìn)樣口溫度：220℃；
——柱溫：初溫50℃，保持1min，然后以8℃/min升至180℃，程序運(yùn)行完成后﹐240℃后運(yùn)行5 min；
——載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速1mL/ min ；電離模式：電子轟擊源（EI，能量為70 eV；
——四級(jí)桿溫度：150℃；
——離子源溫度：230℃；
——傳輸線溫度：250℃；
——溶劑延遲：11 min；
——進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣
——進(jìn)樣量：1μL~2μL；
——檢測(cè)方式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）；
——氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z ）：44、62、74、89，定量離子62；
——D5-氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z）64、76，定量離子64。
5.3定性測(cè)定
按方法條件測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣，低濃度試樣定性可以減少定容體積，試樣的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間的允許偏差小于±2.5% ；定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表1的規(guī)定。
5.4定量測(cè)定
5.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
將氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL，
200 ng/mL，400 ng/mL，1 000 ng/mL（內(nèi)含200 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定，以氨基甲酸乙酯濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液中氨基甲酸乙酯峰面積與內(nèi)標(biāo)D5-氨基甲酸乙酯的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.4.2試樣測(cè)定
將試樣溶液同標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液進(jìn)行測(cè)定﹐根據(jù)測(cè)定液中氨基甲酸乙酯的含量計(jì)算試樣中氨基甲酸乙酯的含量，其中試樣含低濃度的氨基甲酸乙酯時(shí)﹐宜采用10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL，、200 ng/ mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線﹔試樣含高濃度氨基甲酸乙酯時(shí)﹐宜采用50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL、1000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖見(jiàn)附錄A。
6分析結(jié)果的表述
試樣中氨基甲酸乙酯含量按式（l）計(jì)算：
式中：
X——樣品中氨基甲酸乙酯含量，單位為微克每千克（μg/kg）；
c——測(cè)定液中氨基甲酸乙酯的含量，單位為納克每毫升（ng/ mL）；
v——樣品測(cè)定液的定容體積，單位為毫升（mL）；
m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）；
1 000——換算系數(shù)。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示﹐保留3位有效數(shù)。
7精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差﹐當(dāng)含量≤50μg/kg時(shí)，不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%；當(dāng)含量≥50μg/kg時(shí)，不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8其他
當(dāng)試樣取2g時(shí)，本方法氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg。
